Nalgene程序降溫盒為成功的細(xì)胞低溫貯藏和回收提供所需的關(guān)鍵的，可重復(fù)的-1℃/分鐘的冷凍率。僅需要99.99%異丙醇和機(jī)械式冷凍機(jī)。盒子標(biāo)簽上帶有圖形化的使用步驟說(shuō)明?？梢匀菁{18個(gè)管瓶。支架可防止管瓶與醇接觸——以防止由于芯吸作用而造成污染、弄掉標(biāo)簽或在管瓶上留下痕跡。裝有醇的容器可在室溫下存儲(chǔ)，從而節(jié)約了冷凍空間。
細(xì)胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、 -20℃、 -80℃保存，程序降溫方法是利用Nalgene程序降溫盒設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，zui后再放置到液氮槽中長(zhǎng)期保存。Nalgene程序降溫盒的使用經(jīng)驗(yàn)分享如下：
(一)Nalgene程序降溫盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于zui底線。
程序降溫盒肯定是先放在室溫，然后放進(jìn)去細(xì)胞，置于-80，利用異丙醇實(shí)現(xiàn)梯度降溫啊。
(二)異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯(cuò)。
異丙醇熔點(diǎn)：-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性：口服- 大鼠 LD50: 5840 毫克/ 公斤; 口服- 小鼠 LC50: 3600 毫克/ 公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛- 兔子100 毫克/ !請(qǐng)注意清理!
(三)應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因?yàn)樘荻冉禍氐钠鹗键c(diǎn)是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來(lái)的Nalgene程序降溫盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時(shí)間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達(dá)到刻度線，否則降溫效果會(huì)受到影響。
(四)凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對(duì)環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時(shí)候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對(duì)細(xì)胞有毒性，尤其是室溫的時(shí)候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細(xì)胞間的時(shí)候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。
(五)實(shí)驗(yàn)室Nalgene程序降溫盒平時(shí)放4度，需要凍細(xì)胞時(shí)直接拿出來(lái)用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會(huì)影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的，很方便，效果也不錯(cuò)的。
Nalgene程序降溫盒這個(gè)梯度降溫可大大提高細(xì)胞凍存的存活率，由于程序降溫盒內(nèi)存在99.99%濃度的異丙醇和泡沫內(nèi)襯，因此程序降溫盒也可以用于細(xì)胞復(fù)蘇。更多關(guān)于Nalgene程序降溫盒的資料，敬請(qǐng)關(guān)注北京諾博萊德科技有限公司。
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