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正確選擇CST抗體的方法分享
更新時(shí)間:2019-09-12   點(diǎn)擊次數(shù):2559次
   正確選擇CST抗體一般需要如下幾個(gè)方面的信息:

  1)蛋白的名稱及亞型:某些蛋白具有多種不同的亞型,如IKK、PKC、p38等,這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。還有些抗體由于其抗原選擇的是不同蛋白亞型共有的肽段區(qū)域,是可以同時(shí)識(shí)別多個(gè)亞型的,我們一般都會(huì)在抗體的名稱中加入(pan)字樣來(lái)標(biāo)明,如Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691,就可以識(shí)別Akt1、2、3等多個(gè)亞型,結(jié)果反映的也是所有Akt亞型的總水平。

  2)磷酸化修飾位點(diǎn):由于CST抗體有很多是針對(duì)蛋白的磷酸化修飾位點(diǎn),因此CST抗體的命名往往會(huì)在蛋白名稱后加上括號(hào)來(lái)標(biāo)注,如Phospho-4E-BP1 (Ser65) Antibody #9451,Ser65即此抗體識(shí)別的修飾位點(diǎn),在選擇合適的CST抗體用于特定修飾位點(diǎn)研究時(shí),需要特別注意。有關(guān)不同修飾位點(diǎn)的功能,可以通過(guò)查閱文獻(xiàn)確定,或登陸http://www.phosphosite.org(目前全的蛋白修飾位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù))查詢,也可以通過(guò)點(diǎn)擊CST網(wǎng)站該產(chǎn)品頁(yè)面中的Background(背景知識(shí))來(lái)獲取。另外,由于有的蛋白存在不同亞型且序列高度同源,而不同亞型的某些磷酸化修飾位點(diǎn)周?chē)男蛄?相同,因此CST的某些抗體往往會(huì)同時(shí)識(shí)別不同亞型的相似修飾位點(diǎn),如Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb #2697既可識(shí)別Ser176位點(diǎn)磷酸化的IKKα,也可以識(shí)別Ser180位點(diǎn)磷酸化的IKKβ,結(jié)果反映的也是兩者共有的水平。

  3)抗體已驗(yàn)證的應(yīng)用(如WB,IHC,IP等):CST抗體一般會(huì)在出廠前對(duì)常見(jiàn)的抗體應(yīng)用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,F(xiàn)low)進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證,以確定可以滿足的不同應(yīng)用要求。通過(guò)驗(yàn)證,達(dá)到質(zhì)檢要求的抗體會(huì)明確標(biāo)記,以備參考。一些沒(méi)有標(biāo)明的應(yīng)用,往往是因?yàn)榻?jīng)過(guò)驗(yàn)證沒(méi)有達(dá)到質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)而不推薦。比如Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb #13998可以滿足除IF以外的所有其他5種應(yīng)用,有的客戶會(huì)認(rèn)為,既然該抗體可以用于IHC,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)推斷應(yīng)該可以用于IF,那么很有可能會(huì)浪費(fèi)很多時(shí)間和試劑而不能獲得結(jié)果。也有一些沒(méi)有標(biāo)明的應(yīng)用,可能是因?yàn)槲覀儧](méi)有用于檢測(cè)的樣本而沒(méi)有檢測(cè)CST不推薦您使用沒(méi)有標(biāo)明的應(yīng)用??梢蕴暨x其他的貨號(hào),我們可能有適用于這個(gè)應(yīng)用的更好的其它產(chǎn)品。

  另外,一般直接帶有偶聯(lián)物的一抗,只能用于特定的應(yīng)用,也會(huì)明確標(biāo)記。

  4)抗體能夠識(shí)別的樣本種屬:CST抗體一般會(huì)在出廠前對(duì)常見(jiàn)的不同種屬目標(biāo)樣本進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證,以確定可以滿足的不同種屬類型,可以在產(chǎn)品頁(yè)面的Species-Reactivity一欄中看到(如人、小鼠、大鼠等)。通過(guò)驗(yàn)證,達(dá)到質(zhì)檢要求的種屬會(huì)明確標(biāo)記,以備參考。對(duì)于有些抗體,在 Species-Reactivity 的種屬里,有些種屬會(huì)加上括號(hào),這表示根據(jù)序列同源比對(duì),是99.99%符合的,但是我們并沒(méi)有做過(guò)關(guān)于這些種屬的實(shí)驗(yàn),所以不建議使用。

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