QIAGEN試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年,如果保存得當(dāng)?shù)脑挘粫?huì)出現(xiàn)問題的,但不要反復(fù)凍融。
但要注意的是,如果將QIAGEN試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話,可能會(huì)影響,其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。建議:先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測定要求。
已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,ELISA檢測試劑盒開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
溫育是QIAGEN試劑盒測定中影響測定成敗zui為樞紐的一個(gè)因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要留意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附,從而引起非特異顯色。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值泛起:生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式開釋,因此,在測定此類激素時(shí),有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測定值。
溫育這一步是臨床QIAGEN試劑盒測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟,所以有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。
zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以知足測定要求。再如治療藥物的檢測,應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。溫育所需時(shí)間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集,要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。
因此在QIAGEN試劑盒測定中試劑的預(yù)備zui為樞紐的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡,即溫育!